دستگاه HPLC و کاربرد HPLC چیست

دستگاه HPLC

كروماتوگرافی روشي است براي تشخیص و جدا سازی و اندازه گيري مواد HPLC يعني كروماتوگرافي مايع با فشار زياد يا كروماتوگرافی مايع با كاركرد عالي است.

HPLC از دو فاز ثابت و متحرك تشكيل شده است. كه فاز ثابت جامد و فاز متحرك مايع است.

اجزاء و قسمتهاي مختلف دستگاه HPLC

1- مخازن محلول

كه در آنها فاز متحرك و يا محلول هاي شستشو دهنده ستون ريخته شده است.

2- موتور يا پمپ:

چون ستونها نسبتا طويل و اندازه ذرات كم است. به اين جهت قابليت نفوذ كم مي شود و براي اين كه محلول جريان داشته باشد بايد فشار وجود داشته باشد. براي ايجاد فشار از پمپ ها استفاده مي كنيم. پمپ فشاري حدود psi 4500 مي تواند ايجاد كند و بايد فشار آن ثابت باشد. دستگاه HPLC و کاربرد HPLC چیست

محلول توسط پمپ با جریان ثابتي بر روي فاز ثابت حركت داده مي شود. حداكثر جریانی كه فاز متحرك مي تواند داشته باشد ۲،۵ملی لیتر در یک دقیقه است. و نظر به نوع كاري كه مي خواهيم انجام دهيم فلو یا جریان فرق مي كند. هر چه جریان كمتر باشد، فاصله پيك ها بيشتر است.

ميزان فشار بستگي به جریان دارد وقتي جریان ml/min 0.8 است ميزان فشار حدود psi 1500 مي شود.

ميزان فشار بستگي به نوع ستون دارد حداكثر فشار مجاز Psi 3500 است. حداكثر تغييرات فشار Psi 100 است. حداكثر فلوريت Flow rate ، ml/min 2.5 است. پس پمپ، محلول را از مخزن مي گيرد و با سرعت معین آن را بداخل دستگاه وارد مي كند.

به دو روش مي توانيم كار كنيم:

الف: روش ايزوكراتيك isocratic

اگرنسبتهاي مختلفی ازفاز متحرك را دريك مخزن بريزيم و ازهمان مخزن فازمتحرك را برداشت كنيم ازروش ايزوكراتيك استفاده كرده ايم.

ب: روش گراديانت gradient :

اجزاء فاز متحرك در مخازن مختلف قرار دارند.

دستگاه قابليت اين را دارد كه خودش نسبت هاي مختلف را از مخازن برداشت كند، مثلا می خواهيم ازمخزن اول ۸۰ فیصد از مخزن دوم ۸ فیصد و از مخزن سوم ۱۲ فیصدبكشد و بعد نسبت ها را مخلوط مي كند. از اين روش وقتي استفاده مي كنيم كه نسبت هاي موردنظر را نمی دانيم و بخواهيم روش کارپيدا كنيم. ولي وقتي درصد فاز متحرك براي ما روشن شد مي توانيم از روش ايزوكراتيك استفاده كنيم. فاز متحرك با جریان ثابتي بر روي ستون حركت داده مي شود. دستگاه HPLC و کاربرد HPLC چیست

حداكثر فلو یا جریان در این تجربه ml/min0.8 يا 1 است.

بعد از فعال كردن هر پمپ flow rate را از كم به زياد كم كم بالا مي بريم تا حدود ml/min  0.8 يا 1 و مي گذاريم حدود پانزده دقیقه يا نيم ساعت با فلوريت بالا كار كند و بعد فلوريت را به تدريج پايين مي آوريم تا صفر و بعد پمپ را عوض مي كنيم. يا دستگاه را خاموش مي كنيم، فلوريت كه بالا برود فشار هم بالا مي رود. بعد از اتمام كار ستون را با محلول هاي شستشو دهنده مي شوئيم. محلول هاي شستشو را در مخازن ريخته و پمپ ها را به ترتيب فعال مي كنيم اول دستگاه را با آب و متیانول شسته و سپس با متیانول خالص مي شوئيم. هر پمپ را كه فعال كرديم بايد ابتدا هوا گیری کنیم.

3- انجکتر injector:

از سوزن های مختلف با ظرفيت هاي مختلف استفاده مي كنيم.

حجم تزريق ۳- ميكروليتر است.

دستگاه HPLC و کاربرد HPLC چیست

نمونه ابتدا وارد قسمتي بنام گارد كالوم يا پري كالوم ميشود كه محافظ ستون است، طول كاردكالوم حدوديك سانتيمتر است.

و جنس آن از فولاد ضد زنگ است، و ماده پركننده آن از جنس ماده پركننده ستون است.

اگرماده موردتشخیص ناخالصي داشته باشد يابا ماده داخل ستون عملیه کیمیاوی ايجادكند درگاردكالوم انجام ميشود وبه ستون آسيبي نمي رسد.