دستگاه PCR و HLCR چیست

دستگاه PCR و HLCR چیست ؟

کروماتوگرافی روشی است برای تشخیص و جدا سازی و اندازه گیری مواد

HPLC یعنی کروماتوگرافی مایع با فشار زیاد یا کروماتوگرافی مایع با کارکرد عالی است.

HPLC از دو فاز ثابت و متحرک تشکیل شده است. که فاز ثابت جامد و فاز متحرک مایع است.

اجزاء و قسمتهای مختلف دستگاه HPLC

۱- مخازن محلول

که در آنها فاز متحرک و یا محلول های شستشو دهنده ستون ریخته شده است.

۲- موتور یا پمپ:

چون ستونها نسبتا طویل و اندازه ذرات کم است.

به این جهت قابلیت نفوذ کم می شود و برای این که محلول جریان داشته باشد باید فشار وجود داشته باشد. برای ایجاد فشار از پمپ ها استفاده می کنیم. پمپ فشاری حدود psi ۴۵۰۰ می تواند ایجاد کند و باید فشار آن ثابت باشد.

محلول توسط پمپ با جریان ثابتی بر روی فاز ثابت حرکت داده می شود.

حداکثر جریانی که فاز متحرک می تواند داشته باشد ۲،۵ملی لیتر در یک دقیقه است.

و نظر به نوع کاری که می خواهیم انجام دهیم فلو یا جریان فرق می کند. هر چه جریان کمتر باشد، فاصله پیک ها بیشتر است.

میزان فشار بستگی به جریان دارد وقتی جریان ml/min ۰.۸ است میزان فشار حدود psi ۱۵۰۰ می شود. میزان فشار بستگی به نوع ستون دارد حداکثر فشار مجاز Psi ۳۵۰۰ است. حداکثر تغییرات فشار Psi ۱۰۰ است. حداکثر فلوریت Flow rate ، ml/min ۲.۵ است. پس پمپ، محلول را از مخزن می گیرد و با سرعت معین آن را بداخل دستگاه وارد می کند.

دستگاه PCR و HLCR چیست ؟

به دو روش می توانیم کار کنیم:

الف: روش ایزوکراتیک isocratic

اگر نسبت های مختلفی از فاز متحرک را در یک مخزن بریزیم و از همان مخزن فاز متحرک را برداشت کنیم از روش ایزوکراتیک استفاده کرده ایم.

ب: روش گرادیانت gradient :

اجزاء فاز متحرک در مخازن مختلف قرار دارند.

دستگاه قابلیت این را دارد که خودش نسبت های مختلف را از مخازن برداشت کند، مثلا می خواهیم ازمخزن اول ۸۰ فیصد از مخزن دوم ۸ فیصد و از مخزن سوم ۱۲ فیصدبکشد و بعد نسبت ها را مخلوط می کند.

از این روش وقتی استفاده می کنیم که نسبت های موردنظر را نمی دانیم و بخواهیم روش کارپیدا کنیم.

ولی وقتی درصد فاز متحرک برای ما روشن شد می توانیم از روش ایزوکراتیک استفاده کنیم. فاز متحرک با جریان ثابتی بر روی ستون حرکت داده می شود.

PCR چیست؟

PCRبه علت دارا بودن ویژگی وحساسیت بالا وسرعت وسهولت آن جایگاه ویژه ای درتحقیقات وتشخیصهای مولکولی پیدا کرده است.PCR درسال1983توسط دکترMullis ابداع شد،که جایزه نوبل شیمی رادرسال1993 دریافت کرد.

PCR در محیط آزمایشگاه(in vitro) امکان تکثیریک توالی معین ازDNAراکه بین دوتوالی مشخص قراردارد امکان پذیرمی کند تا DNA ازنظرمقدار به حدکافی برسد وبتوان روی آن آزمایشهایی مثل الکتروفورز-ژل آگارز- پلی اکریل آمید،هیبریداسیون باپروب راانجام داد.این روش ازنظرعلمی تشابه زیادی به همانندسازی DNA دارد.دکترMullis اولین بار ازآنزیمDNA پلیمراز اشریشیا کولی برای انجام PCR استفاده کرد.

کاربردPCR

تعین جنسیت جنین،تعیین ژنوتیپ اپیتوپهای پیوندی ،تعیین ژنوتیپ گروههای خونیABO ،تهیه نسخه های متعدداز یک ژن،تشخیص بیماریها واختلالات ژنتیکی ،تشخیص بیماریهای عفونی ،ردابوت وتعیین والدین مطالعات باستان شناسی ،تعیین انواع لوسمیها ،تولیدوطراحی واکسنهای انسانی ودامی ،پزشکی قانونی وانگشت نگاری،DNA ازروی لکه خشک شده خون ،درتشخیص HIV ،سل وبیماریهای مقاربتی.

درحقییقت این تکنیک می رود تا دراینده نتیجه گیری دادگاهها راتحت تأثیرقراردهد.

دانشمندان اکنون می توانند میکروارگانیسمهای غیرقابل کشتی راکه تا کنون نمی توانستند با روشهای کلاسیک میکروب شناسی مورد مطالعه قراردهند به کمک PCR مطالعه نمایند.

دستگاه PCR و HLCR چیست ؟

نمونه های مورداستفاده برای آزمایشگاه مولکولیPCR

طیف وسیعی ازمواد بیولوژیک ،لکه های خون،سرم،بزاق،منی ،مو ،مایع نخاعی ،استخوان، مایع آمنیون،سلولهای خودجنین درمرحله بلاستولا ،نمونه های بیوپسی ویا آتوپسی باشند هرچه آلودگی کمترباشد حساسیت ودقت نتایج بیشتر خواهد بود.